同时，这篇文章提供了一套 “样本处理→测序分析→靶点验证” 的完整单细胞研究路径，堪称 “标准模板”。无论你研究的是食管癌还是其他实体瘤，都可借鉴。今天拆解方案，教你借单细胞复刻高分思路，快跟上前沿！

同时采集患者的外周血和肿瘤组织样本，形成 “外周 - 肿瘤” 配对，既保证样本的关联性，又能对比不同部位的细胞差异。

每个样本至少保留 5×10⁵个活细胞，确保后续测序的细胞覆盖率，这也是单细胞研究数据可靠的基础。

图 1：食管癌患者样本处理流程图

研究采用 10X Genomics 单细胞转录组测序平台，通过 “细胞图谱构建→亚群细分→轨迹分析” 的三层递进策略，成功定位关键细胞亚群。

对 12 例患者的配对样本进行测序，共捕获 15 万 + 个单细胞，通过 UMAP 降维聚类，将细胞分为 T 细胞、B 细胞、巨噬细胞等 8 大类，快速掌握肿瘤微环境的细胞构成。

对比治疗有效组和无效组的细胞频率，发现有效组外周血中 TRGC2+ NKT 细胞占比显著升高（从 5% 升至 18%），进一步通过差异表达分析，确定该亚群高表达免疫激活相关基因（如 IFNG、TNF）。

利用拟时分析工具（Monocle3），绘制 TRGC2+ NKT 细胞的发育分化路径，发现其从 “初始状态→激活状态→效应状态” 的转化过程，且治疗有效组的细胞更易进入效应状态

图 2：单细胞测序分析逻辑图

单细胞测序发现的靶点需经过验证才能体现临床价值，研究通过 “体外共培养 + 体内免疫浸润分析” 双重验证，证实 TRGC2+ NKT 细胞的功能。

将 TRGC2+ NKT 细胞与食管癌细胞共培养，发现该细胞可显著抑制癌细胞增殖（抑制率达 40%），且分泌的细胞因子（IFNG、TNF）浓度是普通 NKT 细胞的 3 倍；

对治疗后患者的肿瘤组织进行免疫组化检测，发现 TRGC2+ NKT 细胞浸润量高的患者，肿瘤退缩更明显，且 3 年无复发生存率提高 25%，直接证明该细胞是治疗反应的潜在生物标志物。

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